Allele-specific PCR
Now that I had confirmed that the amino acid substitution mutations in acetylcholinesterase detected by the graduate student while I was in Edinburgh did indeed change the functional properties of the enzyme, I began to think about the next step. If I had had sufficient research funding to do whatever I wanted, for example, I would probably have sequenced the acetylcholinesterase gene of individual flies to determine exactly which point mutations each individual carried. However, as I mentioned earlier, I had applied for a research position at a research institute but was turned down. My former advisor, who had supported me during my doctoral studies, then took me on as a part-time researcher. Since I was essentially working in a very limited and dependent position, I did not feel that I could attempt anything too ambitious, even if I conducted experiments. At that time, the laboratory did not have a DNA sequencer, an expensive instrument for determining DNA sequences. Therefore, when the graduate student needed to determine DNA sequences, she had to outsource the analysis to an external company, and I had heard that even then it cost tens of thousands of yen (and sometimes possibly hundreds of thousands of yen) to analyze a single sample. Since I was in a limited and dependent position, I could not afford to outsource DNA sequencing as much as I wanted, so I had to look for an analytical method that did not rely on directly determining DNA sequences and that would keep the costs down.
(translated version of the post on November 01, 2021)
対立遺伝子特異的PCR
私がエジンバラに滞在していた間に大学院生が検出したアセチルコリンエステラーゼのアミノ酸置換突然変異が、実際にアセチルコリンエステラーゼの性質を変化させるものであるということを確認できた今、もし私が実際に、自分の裁量で自由にできる研究費があったならば、例えば、ショウジョウバエの個体ごとにアセチルコリンエステラーゼの塩基配列を調べて、それぞれの個体のアセチルコリンエステラーゼにどのような変異が存在しているのかを調べていたことだろうと思います。しかし前にも述べたように、私はある研究所での研究員のポジションに応募して蹴られ、博士課程でお世話になっていた指導教官に、非常勤の研究員として拾ってもらったという、いわば居候のような身分だったので、実験するにしても、あまり大掛かりなことはできないと思っていました。当時、研究室にはシークエンサーというDNAの塩基配列を決定できるような高価な分析機器がなく、大学院生たちがDNAの塩基配列を決定するときには、外部の業者に分析を委託しており、それでも1つのサンプルを分析するのには何万円も（ひょっとしたら何十万円も）かかると伺ったことがあります。このように、居候の身としては塩基配列の分析を業者に好きなだけ委託できるわけもなかったので、コストがあまりかからないように、塩基配列を直接的に決定していくような戦略をとらない分析方法を探さなければなりませんでした。
(2021年11月1日のポストを再掲）