Furthermore, I set out to examine whether the point mutations at three amino acid sites, which the graduate student and I had detected and which French researchers had previously reported as important for organophosphate resistance, actually contributed to resistance. The outline of the experiment was as follows. I established a mass population from individuals newly collected in 2006, allowing various genotypes to be generated through combinations of the multiple alleles identified. I then tested whether individuals from this population would survive exposure to a single concentration of an organophosphate insecticide (malathion). DNA was extracted from both surviving and dead individuals, and their genotypes were determined using allele-specific PCR. By comparing the genotypes of survivors and non-survivors, I expected to be able to directly assess whether the point mutations in acetylcholinesterase were associated with survival or mortality.
(translated version of the post on November 08, 2021)
さらに、フランスの研究者たちが有機リン剤抵抗性に寄与する重要なサイトであると報告していた3つのアミノ酸サイトにおいて、大学院生や私がこれまでに検出してきた点突然変異が、実際に有機リン剤抵抗性に寄与しているのかどうかについて、検討を加えることにしました。このときに行った実験の概略は以下の通りです。すなわち、2006年に新たに採集してきた個体からマス集団を作製し、検出された複数の対立遺伝子の組合せによって様々な遺伝子型が作り出されるようにしました。このような集団の中で産み出された個体について、ある有機リン剤（マラチオン）の1濃度のもとで生存するか否かを調べるとともに、生存した個体だけでなく死亡した個体からもDNAを抽出し、それぞれの個体の遺伝子型を、対立遺伝子特異的PCRによって判別していきました。生存した個体だけでなく、死亡した個体の遺伝子型を調べることによって、生存あるいは死亡に、アセチルコリンエステラーゼで検出された点突然変異が実際に寄与しているかどうかを直接的に判別することができると期待したためです。
(2021年11月8日のポストを再掲）